外泌體的幾種提取方法：

1. 超速離心法

超速離心是目前的外泌體領(lǐng)域的分離“金標(biāo)準(zhǔn)”。超速離心的原理和洗衣機(jī)脫水相同——都利用了離心運(yùn)動。不過超速離心技術(shù)作用可比洗衣機(jī)大得多：細(xì)菌和細(xì)胞的分離，病毒的純化和分離，蛋白質(zhì)、DNA、RNA等大分子以及細(xì)胞線粒體等亞細(xì)胞的分離都不在其話下。超速離心穩(wěn)穩(wěn)抓住物質(zhì)分離的關(guān)鍵——找差異。當(dāng)分離物質(zhì)的沉降系數(shù)“S”差異大（沉降系數(shù)“S”大小取決于物質(zhì)的形狀、大小、質(zhì)量等。不同的“S”意味著不同的沉降速度，離心時“S”大的物質(zhì)先沉底。），可以用差速離心；如果沉降系數(shù)“S”差別不太大（小于一個數(shù)量級），就選擇密度梯度離心。

 

2.超濾離心法

由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質(zhì)，利用不同截留相對分子質(zhì)量(MWCO)的超濾膜對樣品進(jìn)行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細(xì)胞外泌體的一種新方法。

 

3.磁珠免疫捕獲法

外泌體表面有其特異性標(biāo)記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標(biāo)記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結(jié)合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點(diǎn)，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實(shí)驗(yàn)，難以廣泛普及。

 

4. 凝膠色譜法：

凝膠色譜法是先將培養(yǎng)基上清通過濾膜去除大分子蛋白質(zhì)，然后將濾液通過排阻色譜，大分子物質(zhì)會被洗脫下來，最后得到外泌體。此方法操作費(fèi)時，過程較為復(fù)雜。

 

分離之后，可以通過外泌體的物理特征進(jìn)行甄別，外泌體直徑在40-100nm之間，因此可通過電子顯微鏡等方法進(jìn)行直接地觀察。其次，間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體有自己的表面標(biāo)志物如CD81、CD9等，這些可以通過微流式細(xì)胞分析儀、免疫印跡分析、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)進(jìn)行分析鑒定。